紫外可见分光光度法在兽药分析中的应用
当前位置: 主页 > 紫外分光光度计应用 > 紫外可见分光光度法在兽药分析中的应用

紫外可见分光光度法在兽药分析中的应用

  
  摘要:概述了紫外一可见分光光度法在兽药分析中的应用现状,根据其分析原理的不同进行了分类,阐述了其在实 际应用中的注意事项。
  
  自1852年,Beer提出了比尔定律之后[1],紫外一可见分光光度法成为一种重要的、常用的分析手段。药物分析对 于药物质量的检验与控制、生物体液中有关药物含量的测 定以及药代动力学的研究均起着重要的作用。在药物分析 中,由于许多药物结构中具有吸收紫外或可见光的基团或 其能与某些试剂发生颜色反应,因此紫外一可见分光光度 法在分析上得到了普遍应用。
  与其他方法相比,紫外一可见分光光度法操作简便、 灵敏度高、选择性好、干扰少或干扰易于消除。特别是近 几年来,由于新技术、新方法的应用,如:导数光谱法、因 子分析法、双波长与三波长法、差示光度法、人工神经网 络等,与紫外一可见分光光度法合用,使得紫外一可见分 光光度法在药物分析中得到了广泛应用,拓宽了紫外一 可见分光光度法在药物分析中的应用范围。按照紫外一 可见分光光度法利用的分析原理的不同,可将其分为以 下几种情况。
  1直接的紫外_可见分光光度法(UV-Vis)
  一些药物分子本身带有吸收紫外或可见光的基团,在 选择合适的溶剂之后做吸收光谱,在Xmax(最大吸收波长) 处溶剂及其他干扰组分的吸收很小,这时则可直接利用 Xmax进行该药物的测定。例如:布洛芬的测定,可在乙醇溶 液中,于291 nm处直接进行测定;安乃近在无水乙醇中于 266 nm处有强的吸收,可用于其制剂的测定;盐酸环丙沙星 在0.01 mol/L的盐酸中于277 nm处有强的吸收,可用于其 溶液剂的测定;复方水杨酸的主要成分为水杨酸、苯酚、碘 酊,选用304 nm处为水杨酸的测定波长,辅料干扰很小,在 5~25 μg/mL范围内,成功地用于复方水杨酸中水杨酸的测 定。此外,直接的UV-Vis法可以用来鉴别多种中药材的 真伪。
  直接UV-Vis法操作简单,但是由于大部分药物中 其他组分对测定的主要成分都会产生较大的影响,以至 于直接UV-Vis法在UV-Vis法测定中所占的份额愈来愈少
  
  2利用显色反应的紫外_可见分光光度法
  一些药物能与某些显色剂进行反应而显色,所以如 果显色剂选择适当,且具有专一性,就能避免分析过程中 其他成分或杂质的干扰。在可见区,有机药物分析的显色 反应涉及到离子缔合反应、重氮一偶合反应、荷移配位反 应、氣化还原反应、金属离子作显色剂的显色反应等几大 类。比如:安乃近在80 T加热条件下可将磷钼酸还原为 磷钼蓝,在700 nm处有最大吸收,可用于安乃近制剂的 含量分析。又如:可拉明(尼可刹米)在pH=3.1溶液中 可与澳百里酚兰形成可溶于氯仿的稳定的黄色络合物, 在420 nm测定提取物的吸光度可间接测定可拉明的含 量。
  利用显色反应的紫外一可见分光光度法选择性好, 易于排除干扰,是UV-Vis法中常用的一种。从药物分析 的相关文献中可以看出,该类方法占UV-Vis法的大多 数[6-8]。在这些利用显色反应的分析法中,只有那些具有选 择性好、灵敏度高、反应速度快、反应条件易于控制等优 点的化学显色反应,如离子缔合反应、荷移配位反应、金 属离子作显色剂的显色反应等,才真正具有较好的应用 前景。
  3利用络合反应的紫外一可见分光光度法
  一些药物分子在适当溶剂和适当条件下,可以和某 些金属离子络合,络合物在可见区有强的吸收,可用于该 类药物的测定?。比如:在测定布洛芬时,布洛芬在pH= 5.5的醋酸缓冲液中可以和Cu (AC )2溶液反应生成Cu2+- 布洛芬的络合物,用CHCl3萃取该物,在675 nm测定吸 光度可间接测定布洛芬。烟酞胺在pH=6.5的柠檬酸和磷 酸氢二钠溶液中和五氰基氨络高铁(ffl )酸三钠可形成1: 1不能离解的黄色缔合物,在385 nm处有强的吸收,可用 于其含量测定。
  与直接UV-Vis法相比,该种方法可使药物的吸收波长 红移,排除了干扰成分,特别是赋形剂的干扰。
  4一些新技术的应用
  由于药物成分一般很复杂,共存成分的干扰对直接UV-Vis法产生很大的影响,传统的UV-Vis法为了解决该 类问题,将一些分离技术和UV-Vis法相配合而进行测定 (如:薄层色谱、纸色谱久如:戊己丸中小聚碱、巴马亭、苟药 贰,需在硅胶GF254板上,用O-BuOH-H2O-HAC (正丁醇- 水-醋酸)(70:15:15)展开后,分别刮取斑点进行测定。青霉 素烷矾酸钠可在稀NaOH溶液中,37度放置15 min后直接 进行测定。
  为了避免分离操作的繁琐而又能消除其共存组分或杂 质的干扰,近年来科研工作者发展了许多新方法,例如:以 无水乙醇为溶剂,采用一阶导数紫外光谱法,可直接测定利 血生片剂中利血生的含量;用一阶导数UV法测定氣氟沙 星片剂中氣氟沙星的含量 二阶导数UV法测定硫酸阿 托品注射液。
  这些新技术的应用,拓宽了 UV-Vis法在药物分析上 的应用范围,是UV-Vis法发展的一种的新趋势。这些方 法免去了分离的繁琐步骤,一般较快速、简便,应用十分 广泛。从目前发展的趋势来看,分光光度法的发展方向是 采用专属性较强的方法(包括数学方法)不经过分离直接 进行测定。比如:多波长法、导数法、差示法、人工神经网 络法等等。
  5应用中的注意事项 5.1仪器的校正和检定
  5.1.1波长:由于温度变化对机械部分的影响,仪器的波长 经常会略有变动,因此除应定期对所用的仪器进行全面校 正检定外,还应于测定前校正测定波长。常用汞灯中的较强 谱线 237.83,253.65,275.28,296.73,313.16,334.15,365.02, 404.66,435.83,546.07 与 576.96 nm,或仪器中氘灯的 486.02 与656.10 nm谱线进行校正,因钬玻璃在279.4,287.5,333.7, 360.9,418.5,460.0,484.5,536.2 与 637.5 nm 波长处有尖锐 吸收峰,也可作波长校正用,但因来源不同会有微小的差 别,使用时应注意。在实际工作中,常用仪器中氘灯的486.02 与656.10 nm谱线进行校正。
  5.1.2狭缝宽度:选择仪器的狭缝宽度,应以减小狭缝宽度 时供试品的吸收度不再增加为准,对于UV-Vis法测定的大 部分品种,可以使用2 nm缝宽,但对某些品种如青霉素钾 的吸收度检查则需要1nm缝宽或更窄,否则其264 nm的 吸收度会偏低。
  5.1.3吸收池配对:石英吸收池对紫外光亦有吸收,1 cm 的吸收池在波长220~270nm的范围内,以空气作为100%, 其透光率往往小于100 %,同时每个吸收池不可能完全 相同,故在每次测定前应做吸收池配对试验。方法是取干 燥洁净的吸收池,均装入测定用的空白溶剂,以一只吸收 池作空白,用测定时所用的波长测定其他吸收池的吸收 度,最后选择吸收最小的一只作为配对,测定并记录下其 他吸收池的吸收度,供试品液的实际吸收度应是与吸收 池(有空白溶剂时)吸收度之差。为减少误差,常用一个配 对吸收池测定若干样品(也减少计算麻烦),但应注意换 液时充分洗涤。
  5.2对溶剂的要求由于溶剂与溶质分子间形成氢键、偶 极化等的影响,可以使溶质吸收波长发生位移。通常极性溶 剂比非极性溶剂的影响大,在选择溶剂时应予以注意。测定
  供试品前,应先检查所用的溶剂在测定供试品所用的波长附 近是否有吸收峰,是否影响供试品测定。具体操作是用1cm 石英吸收池盛溶剂,以空气为空白(即参比光路不放置任何 物质)测定其吸收度,在220~240nm范围内,溶剂和吸收池 的吸收度不得过0.40,在241~250nm范围内不得过0.20, 在251~300nm范围内不得过0.10,在300 nm以上不得过 0.05。每次测定时应采用同一厂家、同一批号的试剂配制混 合均匀的同一批溶剂。
  5.3测定在实际测定中,应在规定的吸收峰波长±2nm以 内,再测试几个点的吸收度,以核对供试品的吸收峰波长位 置是否正确,除另有规定外,吸收峰最大波长应在该品种项 下规定的波长± 1 nm以内,否则应考虑该试样的真伪、纯度 以及仪器波长的准确度。取吸收池时,手指拿毛玻璃面的两 侧。样品溶液的量以池体积的4/5为宜,透光面要用擦镜纸 由上而下擦拭干净。
  5.4读数一般供试品溶液的吸收度读数,以在0.3~0.7之 间为宜,吸收度在此范围误差较小。
  参考文献:
  [1]朱世盛.仪器分析[M].上海:复旦大学出版社,1983:24- 25.
  [2]周同惠.药物分析[J].分析试验室,1990,9(4):2-3.
  [3]金伯梅.紫外分光光度法测定肝胆宁及其制剂的含量[J]. 药物分析杂志,1996,16(1):50-51.
  [4]王雪明.紫外分光光度法测定复方水杨酸醇溶液中水杨 酸的含量[J].现代应用药学,1996,13(4):55-56.
  [5]马卫兴,韩冬梅.安乃近针剂、片剂含量的分光光度法测 定[J].中国医药工业杂志,1996,27(7):321-322.
  [6]黄红英,邓斌,王存嫦,等.分光光度法测定蔓性千斤拔中 总黄酮的含量[J].安徽农业科学,2008,36(27): 11802?11803.
  [7]梁晓华,徐成东,王陆琴.云南13种蕨类植物中总黄酮的 测定[J].安徽农业科学,2008,36(19): 7965-7966.
  [8]吴洪新,单昌辉,李薇,等.紫外分光光度计法测定菊粉多 糖[J].安徽农业科学,2008,36(13):5251-5253.
  [9]徐大光,阴志刚.紫外一可见分光光度法在药物分析中的 应用及进展[J].中国医学物理学杂志,2006,23(6):432- 433.
  [10]秦远超.茶多酚及其氧化产物与蛋白质络合特性的研究 [J].安徽农业科学,2003,31 (6):983-985.
  [11]尹荃.一阶导数光谱法测定复方茶碱片中的茶碱含量[J]. 药物分析杂志,1988,10(3):166-167.
  [12]何卫民,姜喜安,陈雪云.硫酸阿托品注射液的二阶导数 分光光度测定[J].中国医药工业杂志,1996,27 (8):369- 370.□